磁珠法核酸提取原理是什么?
磁珠法核酸提取的原理跟硅胶膜离心柱相同。
主要是通过运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。
该磁珠能够在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。
利用二氧化硅包被的纳米磁性微球的超顺磁性,在Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下,能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA。
简单来说,磁珠法核酸提取的过程主要是裂解——结合——洗涤——洗脱。
核酸提取方法有哪些?
常用方法:
1、直接提取法,也称鸟枪法。
2、人工合成法:A反转录法,B化学合成法。
具体方法:
1、浓盐法
2、阴离子去污剂法
3、酚/氯仿抽提法
4、水抽提法
5、醇沉淀法
6、热裂解碱法
7、煮沸裂解法
8、纳米磁珠法
9、还有超声法、反复冻融法、酶解法及低渗裂解等等多种方法。
实验室常用的DNA提取方法:
1、Chelex100法:在提取DNA时,加入Chelex100(由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成,含有成对的亚氨基二乙酸盐离子,起着螯合基团作用,对多价金属离子有极强亲和力),螯合了金属离子,防止了DNA降解,提高了PCR扩增成功率。
2、有机法:指用平衡酚(又叫饱和酚)、氯仿等按不同比例混合,采用不同方法提取DNA。
3、磁珠法:(异)硫氰酸胍(GuSCN)是强烈蛋白变性剂,不破坏蛋白质一级结构,能破坏细胞膜及核膜蛋白,并使核酸酶失活,释放DNA。磁珠可以特异性吸附DNA,与DNA结构及片段大小无关。
4、盐析法:溶解红细胞后,离心沉渣用PK消化,用大约6M饱和NaCl沉淀蛋白质,离心上清中DNA用无水乙醇沉淀,用TE溶解。
5、NaOH法:强碱溶解、变性蛋白质,破坏细胞膜及核膜,变性核酸酶,释放DNA,NaOH不破坏DNA一级结构。
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