细胞培养瓶的使用注意事项，注意哪些？

什么是细胞培养瓶

细胞培养瓶是实验室进行长时间细胞培养、大量细胞扩增和防污染的最适培养器皿。细胞培养瓶可方便、安全地处理细胞，确保实验流程安全进行。

细胞培养瓶的材质

细胞培养瓶的材质可分为玻璃的和塑料（聚丙乙烯），玻璃的瓶子表面是亲水的，细胞贴壁效果好，而塑料材质的瓶子需要经过表面的改性处理后才能支持细胞贴壁培养。

细胞培养瓶的贴壁效果

细胞培养瓶的贴壁效果可分为表面改性处理和未表面处理，聚苯乙烯（ＰＳ）表面是憎水的，一次性细胞培养皿等标明Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｔｒｅａｔｅｄ是表示该器皿经过表面的改性处理，适合贴壁细胞的培养。

细胞培养瓶的盖子种类

细胞培养瓶的盖子可分为密闭盖、聚酯盖、透气盖（强烈推荐）、隔垫盖等。

细胞培养瓶的瓶颈种类

细胞培养瓶的瓶颈也有多种样式，有直颈、斜颈、角度颈、三角形、矩形。

细胞培养瓶底部分类

细胞培养瓶的底部可分为正方形、长方形、三角形等，根据细胞贴壁面积又可以分为２５～１７５ｃｍ²多种。

细胞培养瓶的使用注意事项

（１）关于盖子

一次性细胞培养瓶的盖子不要拧得太紧，以保证气体交换。ＨＥＰＥＳ是一种非离子缓冲液，在ｐＨ　７．２－７．４范围内具有较好的缓冲能力，但是非常昂贵，在高浓度时对一些细胞可能有毒。

ＨＥＰＥＳ缓冲液可与低水平的碳酸钠（０．３４ｇ／Ｌ）共用，以抵消因额外加入ＨＥＰＥＳ引起的渗透压增加。在这种培养条件下，一次性细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为ｐＨ指示剂，酸性培养液呈橙黄色，碱性培养液呈深红色。

（２）降低“生长空洞”

多数用户使用的不是的预包被一次性细胞培养瓶，而是普通的一次性细胞培养瓶，其表面环境并不利于无血清培养环境下的间充质干细胞贴壁。３７℃放置５－１０分钟，可让培养基中的促贴壁物质更好地与一次性细胞培养瓶底部结合，使得间充质干细胞的贴壁能力增强，降低“生长空洞”出现的概率。

（３）细胞消化

将瓶子竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入１ｍｌ的ＰＢＳ＋ＥＤＴＡ（０．０２％），来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落，加入１０ｍｌＭＥＭ，混匀，不能吹打，分装２瓶。

如果细胞没长满就脱落，则只需加入５ｍｌＭＥＭ，不分装。

如果瓶中的细胞贴壁较牢固，培养基上清没有细胞脱落碎片，且细胞长满达到８０％以上，吸走培养基，加入５ｍｌ的ＰＢＳ＋ＥＤＴＡ（０．０２％），迅速轻微晃动，竖立培养瓶，吸走，加入１ｍｌ０．０５％胰酶，３７度消化不超过３ｍｉｎ，细胞完全消化脱壁，取出加入１０ｍｌ培养基轻微吸打混匀，分装２瓶。

细胞对于生长环境非常敏感，细胞培养瓶作为一种较为常用的耗材，在操作时更要谨慎，严格按照规定流程进行，避免因操作不当影响细胞生长。

应用场景

一般在实验室使用较多。